REZUMAT
Încă de la finalul secolului trecut, scrapia a fost o preocupare pentru sănătatea publică, datorită caracterului zoonotic al agenților patogeni ce produc așa numitele encefalopatii spongiforme transmisibile (EST). La rumegătoarele mici se cunoaṣte că exprimarea bolii este asociată cu susceptibilitatea genetică a gazdei, astfel încât controlul scrapiei la ovine se realizează prin selecția reproducătorilor rezistenți genetic. O astfel de strategie se aplică ṣi în România pentru controlul scrapie la oi. Nu suntem însă în același stadiu în controlul scrapiei la capre: lipsesc informațiile științifice cu privire la genotipurile proteinei prionice prezente în populațiile de capre din România - atât al raselor locale cât și a celor importate, conditia irefutabila pentru organizarea programului de împerechere in scopul conservării si reproducerii exclusiv a genotipurilor rezistente. Aportul științific al prezentei propuneri de proiect de cercetare este acela de a identifica ṣi caracteriza genotipurile proteinei prionice (PRNP) prezente la rase de capre crescute în ferme de pe teritoriul României. Aceste date vor fi folosite pentru a caracteriza statusul de susceptibilitate la scrapie a animalelor introduse în studiu. Valoarea științifică adăugată a proiectului rezidă în inputul de informație științifică în premieră națională, referitor la susceptibilitatea la scrapie a raselor de capre rezidente in Romania.
Această lucrare a fost susținută de un grant al Universității de Științe Agronomice și Medicină Veterinară din București, numărul de proiect CaPriRo, în cadrul IPC 2021-0004 / 13.07.2021.
DATE GENERALE
Titlul proiectului: Analiza variabilității genei proteinei prionice (PRNP) la rase de caprine din România
Acronimul Proiectului: CaPriRo
Codul proiectului: 2021-0004 / 13.07.2021
Numărul contractului: 1263/30.07.2021
Bugetul proiectului: 150.000 lei
Durata proiectului: 16 luni
Perioada: 30.07.2021 – 30.11.2022 (cu posibilitatea de prelungire cu perioada de durabilitate până la 30.11.2023)
Autoritatea contractantă: Universitatea de Științe Agronomice și Medicină Veterinară București
Responsabil proiect Șef lucrări Dr. Gurău Maria Rodica
OBIECTIVE
Obiectivul principal al proiectului este identificarea genotipurilor PRNP circulante la rase de capre din România. Aceste date primare vor fi prelucrate statistic pentru a permite selectarea genotipurilor vizate. Folosind rezultatele obiectivului menționat anterior, profilul genetic asociat susceptibilitatii la scrapie a diferitelor rase de capre din Romania, se urmărește elaborarea unui program de împerechere care să crească ponderea caprelor cu genotipuri descrise ca rezistente la scrapie. Acum lipsesc datele despre profilul genetic asociat susceptibilitatii la scrapie a caprelor din România, ceea ce face din acest proiect un pionier național care va aduce date utile despre susceptibilitatea genetică la scrapie a caprelor din România.
Activitățile planificate urmăresc determinarea profilului genetic la diferiti codoni ai genei PRNP asociați cu rezistența sau susceptibilitatea la scrapia clasică a caprelor. Polimorfismul PRNP va fi determinat la 150 exemplare din rasele Carpatică, Alba de Banat și Alpina franceză. Cele trei ferme de capre, de la care se va studia polimorfismul genei PRNP vor fi din sud-estul României.
Obiectivul secundar al propunerii de proiect este determinarea fezabilitatății programelor de reproducere care vizează îmbunătățirea rezistenței la scrapia clasică în populația de capre.
Studiul se va efectua pe probe biologice de sânge sau foliculi piloși de la caprele reproducătoare. Probele biologice colectate vor fi supuse studiului genotipurilor genei proteinei prionice. Toate probele de sânge se vor colecta în tuburi care conțin K3-EDTA și depozitate la -20 °C înainte de extracția ADN.
ECHIPA DE CERCETARE
Directorul de proiect- Șef lucrări Dr. Gurău Maria Rodica- Facultatea de Medicina Veterinara
Membrii în proiect:
- Doctorand- Negru Elena - Facultatea de Medicina Veterinara
- Doctorand- Ionescu Teodor - Facultatea de Medicina Veterinara
- Profesor Universitar Dr. Cornea Petruța - Facultatea de Biotehnologii
- Cercetător științific III- Udriste Anca Amalia - Centrul de Cercetare pentru Studiul Calității Produselor Agroalimentare - Laboratorului de Fiziologie Vegetală Moleculară
- Profesor Universitar Dr. Bărăitareanu Stelian - Facultatea de Medicina Veterinara
REZULTATE
Figura 1. Electroforegrame ce arată polimorfismul genei proteinei prionice (PRNP) identificată la caprele din Romania folosind BioEdit Sequence Alignment Editor (ver. 7.2.5). (a) Polimorfismul PRNP pe forward la codonii I142M (G C/TA), H154R (TA/G C), R211R (C A/G T), French Alpine (ID GenBank: ON084837); (b) Polimorfismul PRNP pe revers la codonii I142M (G G/A T), H154R (A T/C G), R211R (G T/C A), Alpina Franceza (ID GenBank: ON084837); (c) PRNP polimorfism pe forward la codonul P110S (A C/A C), Carpatina (ID GenBank: ON417730); (d) Polimorfismul PRNP pe reverse la codonul P110S (G G/T T), Carpatina (ID GenBank: ON417730); (e) Polimorfismul PRNP pe forward la codonul Q168Q (C A/C A), Alba de Banat (ID GenBank: ON084819); (f) Polimorfismul PRNP pe revers la codonul Q168Q (T G/TG), Alba de Banat (ID GenBank: ON084819). Culorile (verde: adenina; albastru: citozina; negru: guanina; rosu: timina) au indicat bazele individuale ale secvenței ADN folosind un secvențior automat ABI PRISM 3130 (Applied Biosystems).
Figura este parte integranta din articolul ”Genetic Polymorphism at 15 Codons of the Prion Protein Gene in 156 Goats from Romania”, autori Maria Rodica Gurau, Elena Negru, Teodor Ionescu, Anca Amalia Udriste, Calina Petruta Cornea, si Stelian Baraitareanu, Genes, 2022, 13, 1316. https://doi.org/10.3390/genes13081316, Received: 21 June 2022, Accepted: 21 July 2022, Published: 23 July 2022,
https://www.mdpi.com/2073-4425/13/8/1316
Figura S2. Electroforegrame la trei capre cu mutații silentioase. Figura este parte integranta din articolul ”Genetic Polymorphism at 15 Codons of the Prion Protein Gene in 156 Goats from Romania”, autori Maria Rodica Gurau, Elena Negru, Teodor Ionescu, Anca Amalia Udriste, Calina Petruta Cornea, si Stelian Baraitareanu, Genes, 2022, 13, 1316. https://doi.org/10.3390/genes13081316, Received: 21 June 2022, Accepted: 21 July 2022, Published: 23 July 2022,
https://www.mdpi.com/2073-4425/13/8/1316
- Bază de date cu lucrări științifice care au avut ca subiect „selection scrapie resistance in goats
- Fișă de lucru pentru extracția ADN din păr cu rădăcină
- Fișă de lucru pentru secvențiere gena PRNP la capre
- Protocol de izolare a ADN genomic din păr de capră cu rădăcină și din probe de sânge
- Protocol de amplificare PCR pentru detecția genei PRNP asociată susceptibilității la scrapie
- Protocol de secvențiere prin metoda Sanger pentru obținerea genei PRNP asociată susceptibilității la scrapie
- Baza de date cu genotipurile obținute la cele 3 rase de capre luate în lucru
- Bază de date cu numerele de acces din GenBank ale secvențelor obținute si introduse în această bază de date
DISEMINARE
Valorificarea rezultatelor
7. S-a redactat si s-a publicat articolul ”Genetic Polymorphism at 15 Codons of the Prion Protein Gene in 156 Goats from Romania”, autori Maria Rodica Gurau, Elena Negru, Teodor Ionescu, Anca Amalia Udriste, Calina Petruta Cornea, si Stelian Baraitareanu. Articolul a fost publicat in revista Genes, 2022, 13, 1316. https://doi.org/10.3390/genes13081316, Received: 21 June 2022, Accepted: 21 July 2022, Published: 23 July 2022.
Articolul poate fi accesat si descarcat de pe adresa: https://www.mdpi.com/2073-4425/13/8/1316
Revista Genes, face parte din lista Q2 a revistelor stiitifice si este cotata cu factorul de impact 4,141.
Table S1. Goats with silent mutations and homo- or heterozygous polymorphisms at 15 codons of PRNP gene
Valorificarea rezultatelor proiectului se va realiza prin îndeplinirea indicatorilor minimi de performanță ai proiectului și anume prin:
- Publicarea / acceptarea spre publicare a unui articol in extenso (Livrabilul 3.1.1.c. Diseminare rezultate parțiale genotipare gena PRNP la capre) într-o revistă ISI cu factor de impact din Q1 sau Q2 (zona roșie respectiv galbenă), directorul de proiect având calitatea de prim autor;
- Publicarea a trei articole in extenso în reviste ISI Emerging Sources Citation Index (Revista Română de Medicină Veterinară; AgroLife Scientific Journal; Scientific papers, series D, Animal Science);
- Prezentarea unei lucrări privind rezultatele parțiale ale cercetărilor, la Conferința internațională ”Agriculture for Life, Life for Agriculture”, organizată de USAMV din București.
Valorificarea rezultatelor
1. S-a redactat primul articol și livrabil cu titlul „Analiza comparativă a procedurii de izolare de ADN total din probe de sânge și foliculi piloși de capre” autori: Gurău Maria Rodica, Crețu Dana Mihaela, Negru Elena, Ionescu Teodor, Udriste Anca Amalia, Cornea Petruța, Bărăităreanu Stelian. Articolul a fost publicat de Revista Română de Medicină Veterinară (revista ESCI) în volumul 31, nr. 4 din 2021.
Revista Romana de Medicina Vetrinara este Indexata ISI
Web of Sciences- ESCI- Clarivate Analytics
2. S-a redactat al doilea articol și livrabil cu titlul „IZOLAREA DE ADN DIN SÂNGE INTEGRAL ȘI FOLICULI PILOȘI LA CAPRE DIN RASA CARPATINĂ” autori: Gurău Maria Rodica, Crețu Dana Mihaela, Negru Elena, Ionescu Teodor, Udriste Anca Amalia, Cornea Petruța, Bărăităreanu Stelian. Articolul a fost publicat de Revista Română de Medicină Veterinară (revista ESCI) în volumul 32, nr. 1 din 2022.
Revista Romana de Medicina Vetrinara este Indexata ISI
Web of Sciences- ESCI- Clarivate Analytics
3. Participare la Salonul Internațional de Invenții și Inovații „Traian Vuia” Timişoara, 12 – 14 octombrie 2021, unde am obținut Medalia de argint și Diploma de excelentă din partea Asociatiei Justin Capră
4. Participare la International Exhibition InventCor, IInd edition, 16-18.12.2021 – Deva, Romania, CORNELIUGROUP research-innovation Association, unde am obtinut medalia de aur.
5. Participare la Salonul International al Cercetarii Stiintifice Inovarii si Inventicii PRO INVENT, Editia XIX, 20-22 octombrie 2021 Cluj Napoca, Unde am obtinut Diploma de excelenta.
6. Participare la Conferinta Agriculture for Life Life for Agriculture, cu lucrarea PRELIMINARY RESULTS OF THE PRION PROTEIN GENE (PRNP) GENOTYPING IN ROMANIAN GOATS, autori: Maria Rodica GURĂU1, Fănel OȚELEA, Elena NEGRU, Teodor IONESCU, Anca Amalia UDRISTE, Petruța CORNEA, Stelian BĂRĂITĂREANU